Mohs IHC 程序

莫氏冷凍組織的標(biāo)本制備

1. 將標(biāo)本嵌入 OCT 中的低溫恒溫器內(nèi)。

2. 在 4-5 µm 處切割切片并安裝在帶正電的載玻片上，例如 Bio SB Hydrophilic Plus 載玻片 (BSB 7028) 或 TintoDetector 蓋間隙載玻片 (BSB 7006) 的下三分之一處。

3. 在室溫下風(fēng)干載玻片 2 分鐘，然后在培養(yǎng)箱或干浴中在 60°C 下孵育載玻片 3 分鐘。

4. 在室溫下用 100% 丙酮或 10% NBF 固定 2 分鐘。如果使用 Bio SB Mohs ImmunoDigestor，使用 10% NBF 10% 會(huì)產(chǎn)生更好的形態(tài)。

5. 對(duì)于固定在丙酮中的載玻片，讓它風(fēng)干。對(duì)于 NBF 中的幻燈片，用蒸餾水沖洗并風(fēng)干。

莫氏冷凍組織的預(yù)處理

1. 將載玻片轉(zhuǎn)移到 ImmunoDNA Washer、TBST 或 PBST 緩沖液中。

2. 使用 Mohs ImmunoDigestor 進(jìn)行 PIER、蛋白水解消化 1 分鐘。在室溫下。

3. 用 ImmunoDNA Washer、TBST 或 PBST 緩沖液沖洗。

IHC 檢測(cè)程序

1. PIER 后，將載玻片轉(zhuǎn)移至 ImmunoDNA 清洗機(jī)，靜置 1-2 分鐘。

2. 對(duì)于手動(dòng)染色，在環(huán)境溫度下進(jìn)行抗體孵育。對(duì)于自動(dòng)染色方法，請(qǐng)根據(jù)儀器制造商的說(shuō)明進(jìn)行抗體孵育。

3. 用 ImmunoDNA 洗滌器或去離子水清洗載玻片。

4. 繼續(xù) IHC 檢測(cè)協(xié)議。用 ImmunoDNA 洗滌液在每個(gè)步驟之間清洗載玻片。

縮寫 Mohs PolyDetector DAB HRP Brown of HRP Green 免疫組化方案

1. 用過(guò)氧化物酶阻滯劑孵育載玻片 30 秒

2. 用緩沖液（TBST 或 PBST）清洗

3. 與一抗孵育 4 分鐘

4. 用緩沖液（TBST 或 PBST）清洗

5. 用 HRP 標(biāo)簽孵育 3 分鐘

6. 用緩沖液（TBST 或 PBST）清洗

7. 準(zhǔn)備

• DAB Brown（在 1ml DAB 緩沖液中加入 1 滴 DAB Chromogen；充分混合）

• 或 HRP Green（在 1 ml HRP Green Buffer 中加入 1 滴 HRP Green Chromogen；充分混合）

8. 用 DAB 或 HRP Green 孵育 2 分鐘

9. 用緩沖液（TBST 或 PBST）清洗

10. 用蘇木精或核固紅復(fù)染 30 秒

11. 用緩沖液（TBST 或 PBST）清洗

12. 使用 AquaMounter 安裝或使用 Fast ChromoProtector 使組織脫水，然后使用 PermaMounter 安裝

此協(xié)議也可用于使用檸檬酸鹽或 EDTA 檢索的 FFPE 組織。