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當(dāng)前位置:首頁(yè)資料下載CompTech MCAR 說(shuō)明書

CompTech MCAR 說(shuō)明書

發(fā)布時(shí)間:2018/7/4點(diǎn)擊次數(shù):635

 

上海起發(fā)為complementtech一級(jí)經(jīng)銷商,Complement Technology,Inc.于2005年成立.CompTech于2005年收購(gòu)Advanced Research TechnologiesComplement Technology繼續(xù)為世界各地的科學(xué)家提供高質(zhì)量的試劑,并在我們的清單中增加了許多新試劑。我們盡力為您的應(yīng)用提供試劑和使用我們補(bǔ)充試劑的建議。 

CompTech MCAR 說(shuō)明書

名稱:       MCAR(Mouse Complement Assay Reagent)

目錄編號(hào):     B250

可用尺寸:        1.0 mL

濃度:          > 0.4 mg / mL  

形式:                         冷凍溶液

緩沖區(qū):                       VBS

防腐劑:             0.025%sodium azide

存儲(chǔ):                     -70 Ò C或以下。

來(lái)源:                       兔子

產(chǎn)地:                       在美國(guó)制造。

 

 

一般描述

小鼠補(bǔ)體很難分析。  小鼠血清迅速喪失其活性,小鼠血清的典型滴度遠(yuǎn)低于人血清中發(fā)現(xiàn)的150-200 CH50單位/ mL。  小鼠品系的補(bǔ)體CH50滴度差異很大(參考文獻(xiàn)1,2和3),許多常見(jiàn)的小鼠品系在遺傳上缺乏C5(參考文獻(xiàn)4和5),這意味著它們即使具有*功能性的補(bǔ)體也不能溶解細(xì)胞。系統(tǒng)。  C5足夠菌株中低滴度的確切原因尚不*清楚,并且它們對(duì)于不同的小鼠品系可能是不同的。  然而,常見(jiàn)的原因是小鼠經(jīng)典途徑組分未被與EA結(jié)合的標(biāo)準(zhǔn)抗體有效激活。  在Complement Technology,Inc。,我們開(kāi)發(fā)了一種*的溶血試劑(MCAR =小鼠補(bǔ)體分析試劑),可以使綿羊紅細(xì)胞敏感,從而提供改善的小鼠CH50滴度。  例如,市售的小鼠補(bǔ)體在下述測(cè)定系統(tǒng)中表現(xiàn)出僅約12單位/ mL的CH50,然而,在MCAR存在的情況下,CH50是217.這是MCAR補(bǔ)體效價(jià)的18倍。  這在數(shù)值上與正常人血清CH50相當(dāng),但是測(cè)定是不同的。  目前我們不能說(shuō)這種試劑可以使用多少小鼠品系,但是我們已經(jīng)使用了3個(gè)MCAR,并且它對(duì)所有人都起到了同樣的作用。  

小鼠血清在小鼠體外也極不穩(wěn)定。  我們已經(jīng)(如果在4左100%的損失解凍后觀察到活性的快速損失ö ℃過(guò)夜)。  因此,我們建議快速解凍NMS并立即在分析中使用它,或者是否需要等分和冷凍NMS。 應(yīng)在水浴中快速解凍,解凍后立即移至濕冰中,等分并盡快重新冷凍。  使用時(shí),僅在實(shí)驗(yàn)裝置準(zhǔn)備好NMS樣品時(shí)解凍,并在解凍后將其保持在濕冰上。

 

測(cè)定

在補(bǔ)體測(cè)定中,即使來(lái)自相同的小鼠品系,每批小鼠補(bǔ)體也將具有不同的滴度。  需要進(jìn)行初步測(cè)定以確定要使用的正確NMS量。  如果MCAR增強(qiáng)裂解,正常致敏綿羊細(xì)胞(EA)效果很好。  大多數(shù)NMS樣品通常含有大量血紅蛋白,因此使用的血清越多,背景越高。  樣品測(cè)定方案顯示在下表中,其中總測(cè)定體積在100uL /測(cè)定下保持小。  通常,管應(yīng)在室溫下設(shè)置緩沖液和MCAR。  然后加入EA,混合并在室溫下溫育5分鐘。    在室溫下將MCAR與EA細(xì)胞孵育5分鐘或更長(zhǎng)時(shí)間后,加入NMS以開(kāi)始測(cè)定。  管應(yīng)該被混合,并轉(zhuǎn)移到一個(gè)37 ö ℃水浴用于與通過(guò)偶爾(每5-10分鐘)再懸浮30分鐘渦旋。 

 

需要注意的一點(diǎn)是,在將EA與MCAR混合后不要將EA離心,并且不要制備EA和MCAR的主混合物,然后移液到管中。  這些程序?qū)?dǎo)致不一致的結(jié)果。

 

在37 30分鐘后Ó C中,測(cè)定法是用200稀釋微升冷GVBE,通過(guò)混合,渦旋,離心以沉淀未裂解的細(xì)胞和200 微升的上清液應(yīng)轉(zhuǎn)移到一個(gè)平底微量和吸光度在415nm讀。  或者,可以使用微量比色皿和分光光度計(jì)。 

 

EA 在GVB ++中以5×10 8 / ml使用,所有稀釋在GVB ++緩沖液中進(jìn)行。

             

Protocol for Titering Normal Mouser Serum and MCAR

Mix &

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Spin

%

 

 

 

 

 

 

5 min

Mouse

 

30 min

Cold

A415

Lysis

#

GVB++

H2O

GVBE

MCAR

EA

21oC

Serum

Mix

@ 37

GVBE

 

 

1

 

 

70 uL

10 uL

10uL

 

10 uL

 

 

200 uL

 

 

2

 

 

70 uL

10 uL

10uL

 

10 uL

 

 

200 uL

 

 

3

90 uL

 

 

 

10uL

 

 

 

 

200 uL

 

 

4

90 uL

 

 

 

10uL

 

 

 

 

200 uL

 

 

5

 

80 uL

 

 

10uL

 

10 uL

 

 

200 uL

 

 

6

 

80 uL

 

 

10uL

 

10 uL

 

 

200 uL

 

 

7

85 uL

 

 

0 uL

10uL

 

5 uL

 

 

200 uL

 

 

8

80 uL

 

 

0 uL

10uL

 

10 uL

 

 

200 uL

 

 

9

70 uL

 

 

0 uL

10uL

 

20 uL

 

 

200 uL

 

 

10

60 uL

 

 

0 uL

10uL

 

30 uL

 

 

200 uL

 

 

11

80 uL

 

 

5 uL

10uL

 

5 uL

 

 

200 uL

 

 

12

75 uL

 

 

5 uL

10uL

 

10 uL

 

 

200 uL

 

 

13

65 uL

 

 

5 uL

10uL

 

20 uL

 

 

200 uL

 

 

14

55 uL

 

 

5 uL

10uL

 

30 uL

 

 

200 uL

 

 

15

75 uL

 

 

10 uL

10uL

 

5 uL

 

 

200 uL

 

 

16

70 uL

 

 

10 uL

10uL

 

10 uL

 

 

200 uL

 

 

17

60 uL

 

 

10 uL

10uL

 

20 uL

 

 

200 uL

 

 

18

50 uL

 

 

10 uL

10uL

 

30 uL

 

 

200 uL

 

 

19

70 uL

 

 

15 uL

10uL

 

5 uL

 

 

200 uL

 

 

20

65 uL

 

 

15 uL

10uL

 

10 uL

 

 

200 uL

 

 

21

55 uL

 

 

15 uL

10uL

 

20 uL

 

 

200 uL

 

 

22

45 uL

 

 

15 uL

10uL

 

30 uL

 

 

200 uL

 

 

23

80 uL

 

 

10 uL

10uL

 

 

 

 

200 uL

 

 

24

80 uL

 

 

10 uL

10uL

 

 

 

 

200 uL

 

 

             

通過(guò)從每個(gè)實(shí)驗(yàn)測(cè)定的A415值(例如#7-22)中減去背景A415值(#1和2的平均值)并除以大裂解(#5和6的平均值)減去%Lysis。背景,然后乘以100。

 

參考

1.   具有典型哺乳動(dòng)物補(bǔ)體活性水平的Ong GL和Mattes MJ小鼠品系。J Immunol Methods 125:147-158,1989。

 

2.   van Dijk,H。等人。  利用致敏兔紅細(xì)胞估計(jì)小鼠補(bǔ)體活性的經(jīng)典途徑。J Immunol Methods 39:257-268,1980。

 

3.   特里WD等人。  近交系小鼠血清補(bǔ)體活性的差異。  J Immunol。92:576-578,1964。

 

4.   Nilsson UR和Muller-Eberhard,HJ缺乏繼承補(bǔ)體缺陷的小鼠的第五組分。J Exp。醫(yī)學(xué)。124:1-16,1967。

 

5. Wetsel,RA等人。小鼠第五補(bǔ)體成分(C5)的缺乏。5'-外顯子中的2堿基對(duì)基因缺失。J. Biol。化學(xué)。265:2435-2440,1990。 

 

 

僅供研究使用。

不適合人類或藥物使用。

 

 

 

complementtech產(chǎn)品目錄:

 

貨號(hào)

品名

規(guī)格 

目錄價(jià)

品牌

A098

C1

200µg

3400

complementtech

A099

C1q

1000µg

3162

complementtech

A100

C1q (40% Glycerol)

1000µg

3162

complementtech

A102

C1r Enzyme

250µg

3417

complementtech

A103

C1s Proenzyme

250µg

3366

complementtech

A104

C1s Enzyme

250µg

3281

complementtech

A140

C1 Esterase Inhibitor

1000µg

3468

complementtech

A112

C2

50µg

3298

complementtech

A113

C3

250µg

2482

complementtech

A113c

C3 (concentrated)

1000µg

7327

complementtech

A118

C3a

50µg

3162

complementtech

A119

C3a desArg

50µg

3043

complementtech

A114

C3b

250µg

3094

complementtech

A115

iC3b

250µg

3417

complementtech

A116

C3c

250µg

3706

complementtech

A117

C3d

100µg

3825

complementtech

A105

C4

250µg

3468

complementtech

A105c

C4 (concentrated)

1000µg

8245

complementtech

A106

C4a

50µg

4114

complementtech

A107

C4a desArg

50µg

4114

complementtech

A108

C4b

250µg

2992

complementtech

A109

C4b Binding Protein

250µg

4131

complementtech

A120

C5

250µg

3570

complementtech

A144

C

30µg

6188

complementtech

A144(300)

C

300µg

詢價(jià)

complementtech

A145

C desArg

50µg

4301

complementtech

A122

C5b,6

50µg

3468

complementtech

A123

C6

250µg

3366

complementtech

A124

C7

250µg

3366

complementtech

A125

C8

250µg

3536

complementtech

A126

C9

250µg

3366

complementtech

A127

SC5b-9 Complex

100µg

2992

complementtech

A135

Factor B

250µg

3213

complementtech

A136

Factor D

25µg

3417

complementtech

A137

Factor H

250µg

2958

complementtech

A137c

Factor H (conc.)

10000µg

詢價(jià)

complementtech

A138

Factor I

100µg

3366

complementtech

A139

Factor P

100µg

3468

complementtech

A150

Cobra Venom Factor  (USA ONLY)

1000µg

3298

complementtech

A154

Factor Ba

100µg

3298

complementtech

A155

Factor Bb

250µg

6188

complementtech

A118

C3a

50µg

3162

complementtech

A119

C3a desArg

50µg

3043

complementtech

A106

C4a

50µg

4114

complementtech

A107

C4a desArg

50µg

4114

complementtech

A144

C

30µg

6188

complementtech

A144(300)

C

300µg

詢價(jià)

complementtech

A145

C desArg

50µg

4301

complementtech

A300

C1q-Dpl

1ml

2074

complementtech

A312

C2-Dpl

1ml

2074

complementtech

A314

C3-Dpl

1ml

2482

complementtech

A305

C4-Deficient Guinea Pig

1ml

2448

complementtech

A308

C4-Dpl           

1ml

2482

complementtech

A320

C5-Dpl

1ml

2125

complementtech

A323

C6-Dpl

1ml

2040

complementtech

A324

C7-Dpl

1ml

2074

complementtech

A325

C8-Dpl

1ml

2074

complementtech

A326

C9-Dpl

1ml

2074

complementtech

A335

Factor B-Dpl

1ml

2074

complementtech

A336

Factor D-Dpl   

1ml

2074

complementtech

A337

Factor H-Dpl

1ml

2686

complementtech

A338

Factor I-Dpl    

1ml

2482

complementtech

A339

Factor P-Dpl

1ml

2482

complementtech

A340

C3/C4 Inactivated Serum

1ml

2074

complementtech

A399

C1q/Factor D-Dpl  

1ml

2856

complementtech

A200

Goat Anti-Human C1q     

1ml

1054

complementtech

A212

Goat Anti-Human C2

1ml

2329

complementtech

A213

Goat Anti-Human C3

1ml

1054

complementtech

A218

Rabbit Anti-Human C3a

1ml

2550

complementtech

A205

Goat Anti-Human C4

1ml

1054

complementtech

A206

Rabbit Anti-Human C4a

1ml

2550

complementtech

A220

Goat Anti-Human C5

1ml

1275

complementtech

A221

Rabbit Anti-Human rC

1ml

2550

complementtech

A223

Goat Anti-Human C6

1ml

1275

complementtech

A224

Goat Anti-Human C7

1ml

1275

complementtech

A225

Goat Anti-Human C8

1ml

1275

complementtech

A226

Goat Anti-Human C9

1ml

1275

complementtech

A227

Rabbit Anti-Human SC5b-9 Neo (lgG)

0.2ml

2584

complementtech

A235

Goat Anti-Human Factor B

1ml

1275

complementtech

A236

Goat Anti-Human Factor D

1ml

2499

complementtech

A237

Goat Anti-Human Factor H

1ml

1275

complementtech

A238

Goat Anti-Human Factor I

1ml

1309

complementtech

A239

Goat Anti-Human Factor P

1ml

1462

complementtech

A240

Goat Anti-Human C1-INH        

1ml

1173

complementtech

A260

Rabbit Anti-Human Vitronectin

1ml

1445

complementtech

NHS

Human Serum

1ml

578

complementtech

GPS

Guinea Pig Serum

1ml

714

complementtech

NRS

Rat Serum

1ml

901

complementtech

NMS

Mouse Serum   

1ml

1309

complementtech

B102

GVB++ (with Ca and Mg)

250ml

1224

complementtech

B100

GVB++ (with Ca and Mg)

1 Liter

3264

complementtech

B103

GVB° (without Ca and Mg)

250ml

1224

complementtech

B101

GVB° (without Ca and Mg)

1 Liter

3264

complementtech

B104

GVBE (with EDTA)

250ml

1224

complementtech

B105

GVBE (with EDTA)

1 Liter

3264

complementtech

B110

SGVB++(low ionic strength w/Sucrose)

250ml

1870

complementtech

B111

SGVB++(low ionic strength w/Sucrose)

1 Liter

5066

complementtech

B112

VBS++ (with Ca and Mg)

250ml

1224

complementtech

B113

VBS++ (with Ca and Mg)

1 Liter

3264

complementtech

B200

EA (Ab-sensitized sheep E)

5ml @ 5x108/ml

3043

complementtech

B201

EA (Ab-sensitized sheep E)

10ml @ 5x108/ml

4556

complementtech

B202

EA (Ab-sensitized sheep E)

20ml @ 5x108/ml

6324

complementtech

B210

Es (sheep E)

20ml @ 5x108/ml

2652

complementtech

B300

Er (rabbit E)

5ml @ 5x108/ml

1649

complementtech

B301

Er (rabbit E)

10ml @ 5x108/ml

2652

complementtech

B302

Er (rabbit E)

20ml @ 5x108/ml

3893

complementtech

B400

Zymosan (preactivated)

10ml @ 1x109/ml

2261

complementtech

B106

MgEGTA

10ml @ 0.1M

1139

complementtech

B250

MCAR

1.0 ml

2482

complementtech

Hemolysin

Hemolysin  NEW

2.0 ml

2040

complementtech

 

 

上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司是實(shí)驗(yàn)試劑一站式采購(gòu)服務(wù)商

1:強(qiáng)大的進(jìn)口輻射能力,血清、抗體、耗材、大部分限制進(jìn)口品等。

2:產(chǎn)品種類齊全,經(jīng)營(yíng)超過(guò)700多個(gè)品牌,基本涵蓋所有生物實(shí)驗(yàn)試劑耗材。

3:提供加急服務(wù),貨品一般1-2周到貨。

4:富有競(jìng)爭(zhēng)力的價(jià)格優(yōu)勢(shì),絕大部分價(jià)格有優(yōu)勢(shì)。

5:多年積累良好的信譽(yù),大部分客戶提供貨到付款服務(wù)。客戶包括清華、北大、交大、復(fù)旦、中山等100多所高校,ROCHE,阿斯利康、國(guó)藥、fisher等藥企。

6:我們還是Santa,Advanced Biotechnologies Inc,Athens Research & Technology,bangs,BBInternational,crystalchem,dianova,FD Neurotechnologies,Inc. FormuMax Scientific,Inc, Genebridege, Glycotope Biotechnology GmbH; iduron,Innovative Research of America, Ludger, neuroprobe,omicronbio, Polysciences,prospecbi, QA-BIO,quickzyme,RESEARCH DIETS,INC,sterlitech;sysy,TriLink BioTechnologies,Inc;worthington-biochem,zyagen等幾十家國(guó)外公司授權(quán)代理。

7:我們還是invitrogen,qiagen,MiraiBioam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等*批發(fā),歡迎合作。

 

 

 

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