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發(fā)布時(shí)間：2018/8/17
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Cytoskeleton，Inc。很高興為藥物篩選，信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞骨架研究提供廣泛的試劑盒和產(chǎn)品。我們專注于生產(chǎn)純化蛋白質(zhì)和易于使用的試劑盒，以研究生物化學(xué)和細(xì)胞過程。我們的試劑盒可用于少量樣品，用于基礎(chǔ)研究或小屏幕（Biochem Kits™），也可用于大屏幕的高通量樣品（CytoDYNAMIX Screens™）。
除了我們現(xiàn)有的產(chǎn)品，我們還在產(chǎn)品線中為微管，微管蛋白，運(yùn)動(dòng)蛋白，小G蛋白效應(yīng)物，GAP，GEF和其他幾種蛋白提供藥物篩選服務(wù)。
Cytoskeleton的Biochem Kits™是用于分析細(xì)胞骨架生物化學(xué)和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的不同方面的綜合試劑盒。這些工具包通常構(gòu)成出版物中圖形的基礎(chǔ)，請(qǐng)查看引文標(biāo)簽中的示例。該試劑盒附帶了分析所需的所有試劑以及如何使用它們的詳細(xì)說明，因此您可以在準(zhǔn)備好試劑盒后立即進(jìn)行分析！
· 測(cè)量蛋白質(zhì)和藥物對(duì)肌動(dòng)蛋白聚合/解聚的影響。
· 發(fā)現(xiàn)和表征肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白（ABPs）。
· 在細(xì)胞或組織裂解物中定量G-肌動(dòng)蛋白（單體）對(duì)F-肌動(dòng)蛋白（聚合物）。
· 將設(shè)置時(shí)間從幾個(gè)月縮短到幾天。
許多出版物引用了在論文的材料和方法部分中使用Cytoskeleton的試劑盒。通常，引文與圖形或圖像形式的特定結(jié)果相關(guān)聯(lián)，這有助于您，作者，您的發(fā)現(xiàn)。這表明套件可在短時(shí)間內(nèi)生成出版物質(zhì)量數(shù)據(jù)，從而有助于提高工作效率。肌動(dòng)蛋白試劑盒的引用示例如下所示。個(gè)別產(chǎn)品頁面上提供了更多引文。??
肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白旋轉(zhuǎn)分析Biochem試劑盒：兔骨骼肌肌動(dòng)蛋白（Cat。＃BK001） |
Takeshita，N.，Ohta，A。和Horiuchi，H。（2005）。CsmA是一種具有肌球蛋白運(yùn)動(dòng)樣結(jié)構(gòu)域的V類幾丁質(zhì)合酶，通過與構(gòu)巢曲霉中肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架的直接相互作用進(jìn)行定位。摩爾。生物學(xué)。細(xì)胞16,1961-1970。 |
Banerjee，J。和Wedegaertner，PB（2004）。鑒定PDZ-RhoGEF中的新序列，其介導(dǎo)與肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架的相互作用。摩爾。生物學(xué)。Cell 15,1760-1775。 |
Kumar，N.，Zhao，P.，Tomar，A.，Galea，CA和Khurana，S。（2004）。絨毛蛋白與磷脂酰肌醇4,5-二磷酸的結(jié)合調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架。J. Biol。化學(xué)。279,3096-3110。 |
Torgler，CN，Narasimha，M.，Knox，AL，Zervas，CG，Vernon，MC和Brown，NH（2004）。Tensin穩(wěn)定果蠅中的整合素粘合劑接觸。開發(fā)。Cell 6,357-369。 |
Oliver，CJ，Terry-Lorenzo，RT，Elliott，E.，Bloomer，W??A，Li，S.，Brautigan，DL，Colbran，RJ和Shenolikar，S。（2002）。將蛋白磷酸酶1（PP1）靶向肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架：neurabin I / PP1復(fù)合物調(diào)節(jié)細(xì)胞形態(tài)。摩爾。細(xì)胞。生物學(xué)。22,4690-4701。 |
Hildebrand，JD和Soriano，P。（1999）。Shroom是一種含有PDZ結(jié)構(gòu)域的肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白，是小鼠神經(jīng)管形態(tài)發(fā)生所必需的。細(xì)胞99,485-497。 |
肌動(dòng)蛋白聚合生物化學(xué)試劑盒（熒光形式）：兔骨骼肌肌動(dòng)蛋白（Cat。＃BK003） |
Takamiya，R.，Takahashi，M.，Park，YS，Tawara，Y.，F(xiàn)ujiwara，N.，Miyamoto，Y.，Gu，J.，Suzuki，K。和Taniguchi，N。（2005）。神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞中突變的Cu，Zn-SOD的過度表達(dá)導(dǎo)致細(xì)胞骨架改變。上午。J. Physiol。288，C253-259。 |
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Zhai，L.，Zhao，P.，Panebra，A.，Guerrerio，AL和Khurana，S。（2001）。絨毛蛋白的酪氨酸磷酸化調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架的組織。J. Biol。化學(xué)。276,36163-36167。 |
Blader，IJ，Cope，MJ，Jackson，TR，Profit，AA，Greenwood，AF，Drubin，DG，Prestwich，GD和Theibert，AB（1999）。GCS1是釀酒酵母中的Arf鳥苷三磷酸酶活化蛋白，是體內(nèi)正常肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架組織所必需的，并且在體外刺激肌動(dòng)蛋白聚合。摩爾。生物學(xué)。Cell 10,581-596。 |
肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白旋轉(zhuǎn)分析Biochem試劑盒：人血小板肌動(dòng)蛋白（Cat。＃BK013） |
Gohla，A.，Birkenfeld，J。和Bokoch，GM（2005）。Chronophin是一種新型HAD型絲氨酸蛋白磷酸酶，可調(diào)節(jié)cofilin依賴性肌動(dòng)蛋白動(dòng)力學(xué)。納特。細(xì)胞生物學(xué)。7,21-29。 |
Falcon-Perez，JM，Starcevic，M.，Gautam，R。和Dell'Angelica，EC（2002）。BLOC-1，一種新的復(fù)合物，含有蒼白素和弱蛋白，參與黑素體和血小板致密顆粒的生物發(fā)生。J. Biol。化學(xué)。277,28191-28199。 |
Zhai，L.，Zhao，P.，Panebra，A.，Guerrerio，AL和Khurana，S。（2001）。絨毛蛋白的酪氨酸磷酸化調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架的組織。J. Biol。化學(xué)。276,36163-36167。 |
Leung，CL，Sun，D.，Zheng，M.，Knowles，DR and Liem，RK（1999）。微管肌動(dòng)蛋白交聯(lián)因子（MACF）：dystonin和肌營??養(yǎng)不良蛋白的雜合體，可與肌動(dòng)蛋白和微管細(xì)胞骨架相互作用。J. Cell Biol。147,1275-1286。 |
G-Actin / F-actin體內(nèi)檢測(cè)Biochem試劑盒（目錄號(hào)BK037） |
Rapier等，2010。癌細(xì)胞Int。10,24 |
Rapier等。（2010年）。細(xì)胞外基質(zhì)微觀形成驅(qū)動(dòng)結(jié)腸癌細(xì)胞中細(xì)胞運(yùn)動(dòng)性和Rho A活性的關(guān)鍵變化。癌細(xì)胞10,24。 |
Meeks，MK，Ripley，ML，Jin，Z。和Rembold，CM（2005）。熱休克蛋白20介導(dǎo)的力抑制毛喉素放松豬頸動(dòng)脈。上午。J. Physiol。288，C633-639。 |
Zhang，W.，Wu，Y.，Du，L.，Tang，DD and Gunst，SJ（2005）。通過N-WASp激活A(yù)rp2 / 3復(fù)合物是肌動(dòng)蛋白聚合和平滑肌收縮所必需的。上午。J. Physiol。288，C1145-1160。 |
Chen，G.，Raman，P.，Bhonagiri，P.，Strawbridge，AB，Pattar，GR和Elmendorf，JS（2004）。磷脂酰肌醇4,5-二磷酸對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞持續(xù)暴露于胰島素誘導(dǎo)的皮質(zhì)絲狀肌動(dòng)蛋白丟失和胰島素抵抗的保護(hù)作用。J. Biol。化學(xué)。279,39705-39709。 |
Tang，DD和Gunst，SJ（2004）。小GTP酶Cdc42在平滑肌的收縮刺激期間調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白聚合和張力發(fā)展。J. Biol。化學(xué)。279,51722-51728。 |
Searles CD，Ide L，Davis ME，Cai H，Weber M（2004）。肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架組織和細(xì)胞生長過程中內(nèi)皮細(xì)胞一氧化氮合酶的轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)。Circulation Research 95,488-495。 |
Tu，Y.，Wu，S.，Shi，X.，Chen，K。和Wu，C。（2003）。Migfilin和Mig-2將細(xì)絲蛋白和肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架的細(xì)胞粘連與細(xì)胞形狀調(diào)節(jié)功能聯(lián)系起來。細(xì)胞113,37-47。 |
問題1：哪種試劑盒是檢測(cè)肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白的*選擇？
答案1： Cytoskeleton有兩個(gè)肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白旋轉(zhuǎn)分析試劑盒，是識(shí)別和表征肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白的理想選擇。一個(gè)試劑盒使用肌肉肌動(dòng)蛋白（Cat。＃BK001），另一個(gè)試劑盒使用非肌肉肌動(dòng)蛋白（Cat。＃BK013）。兩種測(cè)定均利用共沉淀來鑒定蛋白質(zhì)是否與單體或絲狀肌動(dòng)蛋白結(jié)合以及蛋白質(zhì)是否具有F-肌動(dòng)蛋白切斷或成束特性。為了檢查與肌動(dòng)蛋白單體結(jié)合的化合物或蛋白質(zhì)，含有鏈霉抗生物素蛋白包被的孔的96孔板可以與生物素化肌動(dòng)蛋白復(fù)合（Cat。＃AB07）產(chǎn)生肌動(dòng)蛋白單體捕獲蛋白。然后可以將化合物，蛋白質(zhì)或提取物與捕獲蛋白一起溫育，并且可以通過HRP檢測(cè)系統(tǒng)使用針對(duì)目標(biāo)化合物或蛋白質(zhì)的抗體（或標(biāo)記可以與測(cè)試蛋白綴合）來顯現(xiàn)結(jié)合。請(qǐng)記住，緩沖液組成也很重要，因?yàn)樗枰望}（約50 mM）并含有CaCl 2（或其他二價(jià)陽離子）和ATP以維持肌動(dòng)蛋白單體的穩(wěn)定性。有關(guān)兼容緩沖液的示例，請(qǐng)參閱我們的一般肌動(dòng)蛋白緩沖液配方（Cat。＃BSA01-001）。或者，可以用GST標(biāo)記感興趣的蛋白質(zhì)（避免還原劑）并與板綴合，然后與生物素化的肌動(dòng)蛋白一起溫育，并用HRP綴合的鏈霉抗生物素蛋白顯現(xiàn)。
問題2：當(dāng)我對(duì)感興趣的肌動(dòng)蛋白沒有可用的芘結(jié)合物（例如心臟，平滑肌或細(xì)胞質(zhì)肌動(dòng)蛋白）時(shí)，如何用芘測(cè)定法測(cè)量肌動(dòng)蛋白聚合？
答案2： 為了檢查未標(biāo)記肌動(dòng)蛋白的聚合，請(qǐng)點(diǎn)擊此處查看使用過量未標(biāo)記肌動(dòng)蛋白（心肌，平滑肌或細(xì)胞質(zhì)）加10％芘標(biāo)記肌肉肌動(dòng)蛋白的聚合方案。芘肌肉肌動(dòng)蛋白不會(huì)以該測(cè)定中使用的濃度自身聚合，因此反應(yīng)依賴于未標(biāo)記的非肌肉肌動(dòng)蛋白形成F-肌動(dòng)蛋白。以這種方式，芘標(biāo)記的肌肉肌動(dòng)蛋白被吸收并聚合以充當(dāng)用于聚合未標(biāo)記的肌動(dòng)蛋白的報(bào)道分子，其以更高的濃度存在。
問題3：如何從細(xì)胞或組織提取物中測(cè)量G-和F-肌動(dòng)蛋白？
答案3： 確定細(xì)胞或組織樣本中游離球狀肌動(dòng)蛋白（G-肌動(dòng)蛋白）含量與絲狀肌動(dòng)蛋白（F-肌動(dòng)蛋白）含量的可重復(fù)和準(zhǔn)確的方法是使用F-肌動(dòng)蛋白和G-肌動(dòng)蛋白部分的Western印跡定量。 。一般方法是使F-肌動(dòng)蛋白穩(wěn)定緩沖液中的細(xì)胞或組織均質(zhì)化，然后高速離心以將F-肌動(dòng)蛋白與G-肌動(dòng)蛋白池分離。然后通過SDS-PAGE分離級(jí)分，并通過Western印跡定量肌動(dòng)蛋白。終結(jié)果給出了準(zhǔn)確的方法來確定摻入細(xì)胞骨架的F-肌動(dòng)蛋白與細(xì)胞質(zhì)中發(fā)現(xiàn)的G-肌動(dòng)蛋白的比例。細(xì)胞骨架提供了一種簡單易用的選擇，可用G-肌動(dòng)蛋白/ F-肌動(dòng)蛋白體內(nèi)檢測(cè)試劑盒（Cat。＃BK037）定量G-和F-肌動(dòng)蛋白。該試劑盒提供了在不同處理?xiàng)l件下定量細(xì)胞或組織樣品中單體和聚合肌動(dòng)蛋白水平的所有必需試劑。將樣品離心，然后將沉淀（F-肌動(dòng)蛋白）和上清液（G-肌動(dòng)蛋白）溶解于SDS上樣緩沖液中并通過Western印跡處理。
購
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窗體頂端
30-100次分析（Cat。＃BK013）
窗體底端
產(chǎn)品用途包括
· 確定蛋白質(zhì)是否與肌動(dòng)蛋白的細(xì)絲或單體結(jié)合。
· 確定蛋白質(zhì)是否捆綁F-肌動(dòng)蛋白
· 測(cè)試與肌動(dòng)蛋白結(jié)合的各種條件（例如適pH）或要求（例如二價(jià)陽離子要求）
簡介
肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白降速測(cè)定試劑盒提供G-或F-肌動(dòng)蛋白加陽性（α - 肌動(dòng)蛋白）和陰性（牛血清白蛋白，BSA）結(jié)合對(duì)照蛋白。肌動(dòng)蛋白結(jié)合發(fā)生在對(duì)肌動(dòng)蛋白的任何部位具有親和力時(shí)。可以通過使用降速法測(cè)量F-肌動(dòng)蛋白結(jié)合。以這種方式，離心用于通過差異沉降將F-肌動(dòng)蛋白與G-肌動(dòng)蛋白分離。F-肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白將與肌動(dòng)蛋白絲共沉淀并在離心管底部形成沉淀。可以檢測(cè)具有F-肌動(dòng)蛋白成束活性的蛋白質(zhì)，因?yàn)樗鼈儗?dǎo)致F-肌動(dòng)蛋白以比正常更低的離心力沉降（14,000xg對(duì)150,000xg）。F-肌動(dòng)蛋白切斷蛋白，G-肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白或非肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白將留在上清液中。如果上清液中殘留的G-肌動(dòng)蛋白比陰性對(duì)照樣品中的G-肌動(dòng)蛋白更多，則可以預(yù)期切斷蛋白質(zhì)，并且應(yīng)該通過在添加測(cè)試蛋白質(zhì)之前和之后測(cè)量F-肌動(dòng)蛋白長度分布來進(jìn)一步測(cè)試該活性。G-肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白可以通過將測(cè)試蛋白添加到G-肌動(dòng)蛋白并誘導(dǎo)聚合來測(cè)量，如果測(cè)試蛋白螯合G-肌動(dòng)蛋白，那么在旋轉(zhuǎn)測(cè)定期間，與對(duì)照相比，肌動(dòng)蛋白將留在上清液中。
肌動(dòng)蛋白可以以兩種形式存在：球狀亞單位（G-肌動(dòng)蛋白）和絲狀聚合物（F-肌動(dòng)蛋白）（有關(guān)更多信息，請(qǐng)參見關(guān)于肌動(dòng)蛋白頁面）。兩種形式的肌動(dòng)蛋白都與細(xì)胞中過多的蛋白質(zhì)相互作用。到目前為止，有超過50種不同類別的肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白（ABP），而且?guī)齑嫒赃h(yuǎn)未完成。肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白允許肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架快速響應(yīng)細(xì)胞和細(xì)胞外信號(hào)，并且在許多細(xì)胞過程中對(duì)細(xì)胞骨架參與是*的。這些包括細(xì)胞形狀和運(yùn)動(dòng)，肌肉收縮，細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸，細(xì)胞發(fā)病機(jī)理和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。
該試劑盒含有非肌肉肌動(dòng)蛋白（Cat。＃APHL99）。同樣的試劑盒也可用于骨骼肌肌動(dòng)蛋白（Cat。＃AKL99），參見Cat。＃BK001。骨骼肌肌動(dòng)蛋白旋轉(zhuǎn)試劑盒可能更適合用于研究來自肌肉組織的肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白。
試劑盒內(nèi)容
該試劑盒包含足夠的材料，可根據(jù)檢測(cè)體積進(jìn)行30-100次檢測(cè)。包括以下試劑：
00001. 8 x250μg非肌肉肌動(dòng)蛋白（Cat。＃APHL99）。
00002. α- Actinin，陽性對(duì)照（Cat。＃AT01）。
00003. BSA，陰性對(duì)照
00004. 一般肌動(dòng)蛋白緩沖液（Cat。＃BSA01）。
00005. 肌動(dòng)蛋白聚合緩沖液（Cat。＃BSA02）
00006. F-肌動(dòng)蛋白緩沖液。
00007. ATP，100 mM（Cat。＃BSA04）
00008. EGTA，0.5米
00009. 的MgCl 2，100毫
00010. Tris-HCl pH 6.5,1.0M
00011. Tris-HCl pH 7.5,100mM
00012. 手冊(cè)詳細(xì)的協(xié)議和廣泛的故障排除指南
需要的設(shè)備
00001. 離心設(shè)置能夠在4°C和24°C下容量為150,000 xg，體積容量為50-200μl。
00002. SDS-PAGE系統(tǒng)。
00003. 感興趣的蛋白質(zhì)的檢測(cè)系統(tǒng)（考馬斯有利于純化的蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)印跡或銀染色用于較低純度或低豐度的測(cè)試蛋白質(zhì)）。
00004. 用于光密度測(cè)定的凝膠掃描儀。
問題1：當(dāng)使用非肌肉肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白生物化學(xué)試劑盒（Cat。＃BK013或肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白生物化學(xué)試劑盒Cat。＃BK001）時(shí)，制備肌動(dòng)蛋白結(jié)合試驗(yàn)蛋白的*條件是什么？
答案1： 在肌動(dòng)蛋白相容緩沖液（如HEPES或磷酸鹽緩沖液）中使測(cè)試蛋白質(zhì)達(dá)到盡可能高的濃度。高濃度（優(yōu)選>20μM）是優(yōu)化檢測(cè)肌動(dòng)蛋白和測(cè)試蛋白之間相互作用的機(jī)會(huì)所必需的。在某些情況下，K d肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白/肌動(dòng)蛋白相互作用的（解離常數(shù)）可以低到不能通過顆粒的蛋白質(zhì)測(cè)定檢測(cè)到; 然而，對(duì)于肌動(dòng)蛋白在反應(yīng)混合物中的影響可能足以通過沉淀和上清液中的肌動(dòng)蛋白量與陰性對(duì)照的差異來檢測(cè)。我們還建議將測(cè)試蛋白質(zhì)在150,000 xg下在4°C下離心1小時(shí)，以去除變性蛋白質(zhì)和細(xì)胞碎片。如果已經(jīng)采取其他步驟（例如親和柱純化）來純化測(cè)試蛋白，則這不是必需的。高速離心后，取出上清液置于冰上。這是測(cè)試蛋白質(zhì)原料。
總離子強(qiáng)度應(yīng)低于50 mM，這是由于肌動(dòng)蛋白結(jié)合的特性，因此它主要是離子的，因此會(huì)受到中鹽和高鹽緩沖液的影響。一個(gè)好的起始緩沖液是20 mM Hepes pH 7.4加20 mM KCl，加上蛋白酶抑制劑，磷酸酶抑制劑和任何必要的輔助因子。可以用20mM MgCl 2和10mM ATP 制備低鹽肌動(dòng)蛋白聚合10x緩沖液，從而使鹽在終反應(yīng)中保持低水平。
需要考慮的其他問題是（i）測(cè)試蛋白輔助因子可能是必需的，（ii）測(cè)定中的因子可能是主動(dòng)抑制相互作用，（iii）測(cè)試蛋白可能偏愛不同類型的肌動(dòng)蛋白，或（ iv）測(cè)試蛋白質(zhì)在組織提取物中可以是低濃度的。
為了解決這些潛在問題中的一些，可以添加試劑以去除抑制劑，例如用于鈣的EGTA（部件號(hào)BSEG-01）。在運(yùn)動(dòng)蛋白的情況下，ATP / Mg2 +組合將使運(yùn)動(dòng)與F-肌動(dòng)蛋白解離，因此以1mM使用不可水解的類似物如AMPPNP。肌動(dòng)蛋白親和柱可用于濃縮和分離更多的測(cè)試蛋白。后，不同的pH條件可以改善肌動(dòng)蛋白和肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白之間的結(jié)合（例如，α-輔肌動(dòng)蛋白的適pH為7.0）。
問題2：非肌肉肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白生物化學(xué)試劑盒（Cat。＃BK013）可用于測(cè)定非肌肉肌動(dòng)蛋白和肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白之間的結(jié)合親和力嗎？
答案2： 結(jié)合親和力（K d）可以通過旋轉(zhuǎn)降低測(cè)定來估計(jì)，通過滴定測(cè)試蛋白質(zhì)濃度在0.2和20μM之間，并找到原始蛋白質(zhì)在顆粒中的一半的濃度。繪制百分比測(cè)試蛋白質(zhì)結(jié)合對(duì)比反應(yīng)中的原始濃度以獲得以μM計(jì)的Kd。
問題3：細(xì)胞裂解液可以與非肌肉肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白生物化學(xué)試劑盒（Cat。＃BK013）一起用作測(cè)試蛋白的來源嗎？
答案3：是的，細(xì)胞裂解液可用作測(cè)試蛋白的來源。然而，細(xì)胞骨架不建議這樣做，因?yàn)榈鞍踪|(zhì)的純度和濃度通常太低而不能與肌動(dòng)蛋白相互作用。此外，裂解物將含有額外的輔助蛋白和多種磷酸酶和蛋白酶，它們可以干擾或改變肌動(dòng)蛋白和肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白之間的相互作用。如果要使用裂解物，我們建議如下：
盡管該試劑盒設(shè)計(jì)用于純蛋白質(zhì)或化合物，但一些研究人員已經(jīng)添加了具有良好結(jié)果的提取物。通常研究人員使用過表達(dá)的蛋白質(zhì)和類似過表達(dá)的野生型對(duì)照提取物。需要制備10mg / ml蛋白質(zhì)提取物，然后將其1/3體積用于1mg / ml的2/3體積的肌動(dòng)蛋白。以這種方式，存在足夠高的蛋白質(zhì)濃度以指示結(jié)合。提取緩沖液應(yīng)為20mM Hepes緩沖液pH 7.4,20mM NaCl，加上蛋白質(zhì)的任何輔因子，以及蛋白酶抑制劑混合物如Cat。＃PIC02。也可加入磷酸酶抑制劑。用冰冷的緩沖液沖洗細(xì)胞，用注射器針頭或其他裝置彎曲25g裂解細(xì)胞。pH可以將肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白（ABP）的F-肌動(dòng)蛋白結(jié)合特性改變0至100％。對(duì)于提取物制備，測(cè)試pH 6.5,7.5和8.5是個(gè)好主意。對(duì)照細(xì)胞系非常關(guān)鍵，因?yàn)闈撛诘腁BP可能通過其他途徑出現(xiàn)在顆粒中; 例如，變性或與其他細(xì)胞蛋白質(zhì)聚集。總離子強(qiáng)度應(yīng)保持在50 mM以下，以免使任何潛在的ABP脫鹽。
· 概述
· 常見問題解答
Cytoskeleton Inc致力于為肌動(dòng)蛋白和肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白提供高質(zhì)量的抗體。我們?cè)谠撓盗挟a(chǎn)品中的所有抗體均經(jīng)過QC Max™測(cè)試。已經(jīng)測(cè)試QC Max TM抗體用于蛋白質(zhì)印跡，原位和免疫沉淀。這樣，您就可以準(zhǔn)確了解每種抗體的用途，并確保購買適合您的抗體。如果您對(duì)我們的QC Max™抗體有關(guān)的詳細(xì)信息，請(qǐng)點(diǎn)擊下面列出的產(chǎn)品以獲取更多詳細(xì)信息。
問題1：在細(xì)胞和組織中染色F-肌動(dòng)蛋白的*方法是什么？
答案2： 細(xì)胞骨架提供我們的Acti染色系列熒光標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽，可在固定細(xì)胞和組織樣本中特異性染色F-肌動(dòng)蛋白。Acti染色熒光鬼筆環(huán)肽探針非常明亮和穩(wěn)定，為標(biāo)記F-肌動(dòng)蛋白提供了一種非常簡單和經(jīng)濟(jì)的方法。鬼筆環(huán)肽用不同的綠色和紅色熒光團(tuán)（Cat。＃PHDG1，PHDR1，PHDH1和PHDN1）標(biāo)記。也可以使用肌動(dòng)蛋白抗體，但通常那些也染色G-肌動(dòng)蛋白，這產(chǎn)生高背景。
問題2：您對(duì)多克隆抗肌動(dòng)蛋白抗體有何推薦稀釋度？
答案2： 抗體的稀釋度取決于所使用的細(xì)胞/組織類型和實(shí)驗(yàn)形式。對(duì)于蛋白質(zhì)印跡，我們已經(jīng)測(cè)試并推薦使用濃度為500ng / ml（1：1000稀釋）的抗體。在該稀釋度下，我們?cè)诜侵拮?nbsp;A6細(xì)胞，小鼠Swiss 3T3細(xì)胞，大鼠NRK細(xì)胞，人HeLa細(xì)胞和血小板細(xì)胞的細(xì)胞提取物中檢測(cè)到肌動(dòng)蛋白。對(duì)于免疫熒光，我們使用抗肌動(dòng)蛋白抗體檢測(cè)小鼠Swiss 3T3細(xì)胞中的肌動(dòng)蛋白。抗體以2μg/ ml（1：500稀釋）的濃度使用，然后與1：500稀釋的抗兔羅丹明綴合的第二抗體一起溫育。這些信息通常在圖例中或我們的抗體數(shù)據(jù)表的“產(chǎn)品用途”部分中找到。
貨號(hào) | 品名 | 規(guī)格 | 品牌 |
BK165-S | Signal-Seeker™ SUMOylation 1 Detection Kit | (10 assay) | cytoskeleton |
BK165 | Signal-Seeker™ SUMOylation 1 Detection Kit | (30 assay) | cytoskeleton |
BK163-S | Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit | (10 assay) | cytoskeleton |
BK163 | Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit | (30 assay) | cytoskeleton |
BK160-S | Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit | (10 assay) | cytoskeleton |
BK160 | Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit | (30 assay) | cytoskeleton |
BK162-S | Signal-Seeker™ SUMOylation 2/3 Detection Kit | (10 assay) | cytoskeleton |
BK162 | Signal-Seeker™ SUMOylation 2/3 Detection Kit | (30 assay) | cytoskeleton |
BK161-S | Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit | (10 assay) | cytoskeleton |
BK161 | Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit | (30 assay) | cytoskeleton |
AAC04-Beads | Acetyl-Lysine Affinity Beads | ea | cytoskeleton |
APY03-Beads | Anti-Phosphotyrosine Affinity Beads | ea | cytoskeleton |
ASM11-Beads | SUMOylation 1 Affinity Beads | ea | cytoskeleton |
ASM24-Beads | SUMOylation 2/3 Affinity Beads | ea | cytoskeleton |
UBA01-Beads | Ubiquitination Affinity Beads | ea | cytoskeleton |
CIG02-Beads | Acetyl-Lysine Control Beads | ea | cytoskeleton |
CIG03-Beads | SUMO1 IP Control Beads | ea | cytoskeleton |
CIG01-Beads | IgG Control Beads | ea | cytoskeleton |
CUB02-Beads | Ubiquitination Control Beads | ea | cytoskeleton |
BLR01 | BlastR™ Rapid Lysate Prep Kit | ea | cytoskeleton |
BLR02 | BlastR™ Rapid Filtration Kit | ea | cytoskeleton |
AAC02 | Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (7B1) | ea | cytoskeleton |
AAC03 | Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (19C4B2.1) | ea | cytoskeleton |
AAC03-HRP | Acetyl Lysine-HRP Antibody Mouse Monoclonal (19C4B2.1) | ea | cytoskeleton |
AAC01 | Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (3C6.08.20) | ea | cytoskeleton |
APY03 | Phosphotyrosine Antibody Mouse Monoclonal (27B10) | ea | cytoskeleton |
APY03-HRP | Phosphotyrosine-HRP Antibody Mouse Monoclonal (27B10) | ea | cytoskeleton |
ASM01 | SUMO1 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 5D8B16) | ea | cytoskeleton |
ASM24 | SUMO-2/3 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 11G2) | ea | cytoskeleton |
ASM23 | SUMO-2/3 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 12F3) | ea | cytoskeleton |
ASM23-HRP | SUMO-2/3-HRP Antibody Mouse Monoclonal (Clone 12F3) | ea | cytoskeleton |
AUB01 | Ubiquitin Antibody Mouse Monoclonal | ea | cytoskeleton |
AUB01-HRP | Ubiquitin-HRP Antibody Mouse Monoclonal | ea | cytoskeleton |
PHDG1 | Acti-stain 488 phalloidin | ea | cytoskeleton |
PHDH1 | Acti-stain 555 phalloidin | ea | cytoskeleton |
PHDN1 | Acti-stain 670 phalloidin | ea | cytoskeleton |
BK001 | Actin Binding Protein Spin-Down Assay Biochem Kit: rabbit skeletal muscle actin | ea | cytoskeleton |
BK003 | Actin Polymerization Biochem Kit (fluorescence format): rabbit skeletal muscle actin | ea | cytoskeleton |
AKL95 | Actin protein (>95% pure): rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton |
AD99 | Actin protein (>99% pure): bovine cardiac muscle | ea | cytoskeleton |
AS99 | Actin protein (>99% pure): chicken gizzard muscle | ea | cytoskeleton |
AKL99 | Actin protein (>99% pure): rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton |
AKF99 | Actin protein (pre-formed filaments): rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton |
AP05 | Actin protein (pyrene labeled): rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton |
APHR | Actin protein (rhodamine): human platelet | ea | cytoskeleton |
AR05 | Actin protein (rhodamine): rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton |
AT01 | Alpha-actinin protein: rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton |
RP01P | Arp2/3 protein complex: porcine brain | ea | cytoskeleton |
CS-TFC01 | Cardiac Thin Filament Complex (CTFC) | ea | cytoskeleton |
CF01 | Cofilin 1 protein: human recombinant | ea | cytoskeleton |
HPG6 | Gelsolin protein: Homo sapiens recombinant | ea | cytoskeleton |
MH01 | Heavy meromyosin protein | ea | cytoskeleton |
CS-MH03 | Heavy Meromyosin Protein (HMM Fragment) | ea | cytoskeleton |
CS-MYS03 | Myosin - cardiac S1 fragment | ea | cytoskeleton |
CS-MYS04 | Myosin - skeletal muscle S1 fragment | ea | cytoskeleton |
CS-MYS05 | Myosin - smooth muscle S1 fragment | ea | cytoskeleton |
MY02 | Myosin II protein: rabbit skeletal muscle | ea | cytoskeleton |
MY03 | Myosin protein: bovine cardiac muscle | ea | cytoskeleton |
PR02 | Profilin 1 protein: Untagged, human recombinant | ea | cytoskeleton |
PHDR1 | Rhodamine Phalloidin | ea | cytoskeleton |
CY-SC001 | SiR-Actin Kit | ea | cytoskeleton |
CY-SC013 | SiR700-Actin Kit | ea | cytoskeleton |
VCG03 | WASP protein VCA domain: GST tagged: human | ea | cytoskeleton |
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7：我們還是invitrogen,qiagen,MiraiBioam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等知*批發(fā)，歡迎合作。
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