ALSTEM VP100說(shuō)明書(shū)

ALSTEM是一家位于灣區(qū)的早期生物技術(shù)公司，擁有快速擴(kuò)展的產(chǎn)品和服務(wù)組合，為生物制藥和學(xué)術(shù)機(jī)構(gòu)提供服務(wù)。受到加利福尼亞干細(xì)胞研究承諾的啟發(fā)，ALSTEM于2012年由具有iPS細(xì)胞重編程和基因組編輯技術(shù)專(zhuān)業(yè)知識(shí)的科學(xué)家創(chuàng)立。

Lentiviral Packaging Mix: #VP100

慢病毒包裝混合物：＃VP100

描述

慢病毒包裝混合物是一種即用型第三代基于HIV的慢病毒包裝系統(tǒng)，其中質(zhì)粒表達(dá)慢病毒生產(chǎn)所需的元件。為了生產(chǎn)高質(zhì)量的慢病毒顆粒，所需要的只是含有您感興趣基因的慢病毒表達(dá)載體。慢病毒包裝混合物含有必需的包裝載體，其含有病毒結(jié)構(gòu)蛋白和包膜載體以表達(dá)水泡性口炎病毒糖蛋白（VSVG）。慢病毒包裝混合物是TAT獨(dú)立的，因?yàn)樗鼉H支持具有嵌合5'LTR的慢病毒表達(dá)載體，其中HIV啟動(dòng)子被CMV或RSV替代。

• 概觀

慢病毒包裝混合物是第三代包裝質(zhì)粒的優(yōu)化配方，提供輔助功能以及產(chǎn)生高滴度慢病毒所需的反式結(jié)構(gòu)和復(fù)制蛋白。

1.將含有慢病毒顆粒的培養(yǎng)基從平板轉(zhuǎn)移到無(wú)菌容器中，并以300×g離心培養(yǎng)基10分鐘以除去細(xì)胞碎片。

2.通過(guò)0.45μm過(guò)濾器過(guò)濾上清液。

3.將過(guò)濾的上清液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌容器中，并向每4體積的含有慢病毒的上清液中加入1體積的冷的慢病毒沉淀溶液（4℃）。（實(shí)施例：5ml慢病毒沉淀溶液，含20ml病毒上清液）。

4.充分混合并冷藏3小時(shí)至過(guò)夜。與Lentivirus沉淀溶液混合的含有慢病毒的上清液在4°C下可穩(wěn)定長(zhǎng)達(dá)4天。

5.在4℃下以1500×g離心混合物30分鐘。離心后，慢病毒顆粒可在容器底部顯示為米色或白色顆粒。

6.丟棄上清液。通過(guò)以1500×g離心5分鐘來(lái)旋轉(zhuǎn)殘留溶液。通過(guò)抽吸去除所有的液體痕跡，小心不要打擾顆粒中沉淀的慢病毒顆粒。

7.使用冷的無(wú)菌PBS或DMEM在4℃下以1/10至1/100的原始體積重懸慢病毒顆粒。

8.在低溫小瓶中分裝并儲(chǔ)存在-80°C直至準(zhǔn)備使用。

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