Quickzyme QZBtotcol1操作方法

介紹

膠原是細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分之一。膠原生成的失調(diào)會(huì)導(dǎo)致纖維化（過多的膠原）或骨關(guān)節(jié)炎（過少的膠原）等病理變化。

因此，在許多情況下，膠原蛋白的測(cè)定是很重要的

疾病相關(guān)研究。

quickzyme總膠原測(cè)定是基于羥脯氨酸的檢測(cè)。羥脯氨酸是一種非蛋白性氨基酸，存在于哺乳動(dòng)物的彈性蛋白和膠原蛋白中。它的存在主要局限于膠原的三螺旋，在那里它的存在增加了三螺旋的穩(wěn)定性。羥脯氨酸是在脯氨酸羥化酶的作用下由特定的脯氨酸殘基翻譯后形成的。組織水解物中的羥脯氨酸可以直接測(cè)量膠原蛋白的含量。

膠原的測(cè)定是從組織樣品在95oC的6M HCl中*水解開始的。水解產(chǎn)物中的羥脯氨酸殘基通過對(duì)prockop和udenfriend（anal）所述方法的改進(jìn)進(jìn)行定量。Biochem.，1960，1:228-239）。該分析測(cè)量了樣品中羥脯氨酸的總量，它代表了樣品中存在的所有類型的膠原，而不區(qū)分膠原類型和前膠原、成熟膠原和膠原降解。

產(chǎn)品

該測(cè)定是簡單的，并且結(jié)果在570 nm處具有大的吸光度。這種分析方法的發(fā)展使得它不需要酸水解后的干燥步驟，而酸水解通常需要特殊的設(shè)備。

膠原蛋白標(biāo)準(zhǔn)線樣品制備的移液方案

分析程序

建議對(duì)所有樣品和標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行分析，一式兩份

一。按照“樣品制備”中的說明制備樣品。

2.按照“標(biāo)準(zhǔn)制備”中的說明制備膠原蛋白標(biāo)準(zhǔn)品。

三。用移液管將35微升標(biāo)準(zhǔn)溶液移到分析微孔板的適當(dāng)孔中。

四。用移液管將35μl稀釋的水解未知樣品（在4M HCl中）移到適當(dāng)?shù)目字小?/p>

5個(gè)。每孔加入75μl試液，混勻。

6.用一個(gè)封閉的膠粘板封條蓋住板，在室溫下孵育20分鐘，同時(shí)搖動(dòng)板。

7。通過檢測(cè)試劑A和B2:3（RESP 30μL＋45 L L/阱）混合，制備一套足以檢測(cè)待測(cè)威爾斯（75μL/阱）的試劑。

8。小心地拆下板密封件

9。每口井加入75μl檢測(cè)試劑。

10。用封閉的粘合板密封件蓋住板。

11。搖動(dòng)盤子使之充分混合。在60°C的烘箱中培養(yǎng)60分鐘（不要使用更高或更低的溫度）。

12。把盤子放在冰上冷卻5分鐘至室溫

13。混合板并小心地拆下板密封件

14。清潔板底部，在570 nm（可接受540-580 nm）下讀取板并進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

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